目的 利用基因工程技术表达单纯疱疹病毒(HSV)包膜糖蛋白(gC)并进行验证.方法 分两段合成gC蛋白,分别合成基因GC-F和GC-R,并分别将基因亚克隆进pSumo-Mut(含Stu Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点)和pCzn1(含Nde Ⅰ和XhoI酶切位点)表达载体,获得pSumo-Mut-GC-F和pCzn 1-GC-R质粒.将两重组质粒转化ArcticExpressTM(DE3)原核宿主菌,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,经Ni柱亲和纯化,最终获得高纯度蛋白.采用Western印迹法检测重组GC-F和GC-R两段蛋白与HSV IgG的结合情况.结果 应用全基因合成方法获得GC-F和GC-R基因片段,经SDS-PAGE鉴定分析,主要分布于沉淀层,经亲和层析后获得的蛋白纯度在80％以上,并可被人抗HSV-1抗体(IgG)阳性血清识别.结论 利用基因工程技术构建融合表达载体,并经IPTG诱导成功表达gC蛋白,与HSV-1感染血清反应阳性,是后续进行功能研究的理想实验材料.
作者：张宇；姚煦；顾汉艳；王宝玺；刘军
来源：中华皮肤科杂志 2014 年 47卷 8期
