目的 通过体外实验研究骨髓间充质干细胞(MSC)旁分泌肝细胞生长因子(HGF)对大鼠肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤的修复作用及其相关机理.方法 获取和培养大鼠骨髓MSC;构建HGF siRNA质粒对MSC进行转染,将大鼠MSC进行相应的基因沉默;建立大鼠大鼠肾小管上皮细胞系NRK-52E(简称:NRK)缺氧复氧模型.在前述基础上,实验共分4组建立上下共培养体系,(1)对照组:将未进行缺氧复氧处理的NRK单独培养;(2)缺氧复氧组:将进行了缺氧复氧处理的NRK单独培养;(3)野生MSC组:上室中加入缺氧复氧后的NRK,下室中加入野生型MSC;(4)转染MSC组:上室中加入缺氧复氧后的NRK,下室中加入转染了HGF siRNA的MSC.采用MTT法检测NRK增殖情况,采用实时荧光定量聚合酶链反应试剂盒检测各组HGF、HMGB1、IL-1β及TNF-αmRNA的相对表达量,采用蛋白质印迹法检测HGF、HMGB1、IL-1β及TNF-α蛋白的表达.结果 MSC转染HGF siRNA的效果较好,转染率在70％以上;转染HGF siRNA后MSC的HGF mRNA表达水平显著降低.随培养时间的延长各组NRK均有增殖,培养32 h时野生型MSC组NRK的增殖率最高,转染MSC组次之,缺氧复氧组最低(P＜0.01).缺氧复氧组HMGB1、IL-1β及TNF-αmRNA的相对表达量均为最高,转染MSC组次之,野生MSC组最低,3组间两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).

作者：张磊；陈正；马俊杰；方佳丽；李光辉；徐璐；张异蕊；郭予和；潘光辉

来源：中华器官移植杂志 2014 年 35卷 12期