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目的 探讨小鼠乳腺癌细胞(4T1)和小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)共培养构成的肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)中,过氧化物酶体增殖物激活受体y辅助活化因子1α(PGC-1α)促进4T1细胞侵袭的作用机制.方法 (1)提取PMs并用小发卡RNA(shRNA)敲低PGC-1α蛋白表达:采用原代细胞提取的方法提取PMs,并用低表达PGC-1α的shRNA(sh-PGC-1α-1、sh-PGC-1α-2、sh-PGC-1α-3)转染细胞,然后用Western blot检测PMs[对照组(PMs组)、阴性对照组(sh-control)、sh-PGC-1α-1组、sh-PGC-1α-2组、sh-PGC-1α-3组]中PGC-1α蛋白表达水平,选取抑制效果最好的shRNA用于实验.所得低表达PGC-1α的sh-PGC-1α PMs为本实验所需.(2)验证TAMs中PGC-1α蛋白表达水平:利用Transwell建立PMs/sh-PGC-1α PMs和4T1细胞的共培养体系,得到TAMs/sh-PGC-1α TAMs.收集细胞并提取蛋白,用Western blot检测对照组(PMs组)、TAMs组、sh-PGC-1α TAMs组PGC-1α蛋白表达水平.(3)验证共培养体系中4T1细胞的侵袭、迁移、愈合能力:利用Transwell小室模型观察对照组(4T1组)、TAMs组、sh-PGC-1α TAMs组4T1细胞的侵袭、迁移数;利用创伤愈合实验观察对照组(4T1组)、TAMs组、sh-PGC-1α TAMs组4T1细胞的愈合情况.(4)验证共培养体系中PMs的PGC-1α对4T1细胞发生细胞上皮-间质转化

作者:靳鑫;王园园;倪田根;王宁;罗浩军;明佳

来源:中华乳腺病杂志(电子版) 2020 年 14卷 2期

知识库介绍

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作者:
靳鑫;王园园;倪田根;王宁;罗浩军;明佳
来源:
中华乳腺病杂志(电子版) 2020 年 14卷 2期
标签:
乳腺肿瘤 巨噬细胞 转录因子 肿瘤侵润 肿瘤转移
目的 探讨小鼠乳腺癌细胞(4T1)和小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)共培养构成的肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)中,过氧化物酶体增殖物激活受体y辅助活化因子1α(PGC-1α)促进4T1细胞侵袭的作用机制.方法 (1)提取PMs并用小发卡RNA(shRNA)敲低PGC-1α蛋白表达:采用原代细胞提取的方法提取PMs,并用低表达PGC-1α的shRNA(sh-PGC-1α-1、sh-PGC-1α-2、sh-PGC-1α-3)转染细胞,然后用Western blot检测PMs[对照组(PMs组)、阴性对照组(sh-control)、sh-PGC-1α-1组、sh-PGC-1α-2组、sh-PGC-1α-3组]中PGC-1α蛋白表达水平,选取抑制效果最好的shRNA用于实验.所得低表达PGC-1α的sh-PGC-1α PMs为本实验所需.(2)验证TAMs中PGC-1α蛋白表达水平:利用Transwell建立PMs/sh-PGC-1α PMs和4T1细胞的共培养体系,得到TAMs/sh-PGC-1α TAMs.收集细胞并提取蛋白,用Western blot检测对照组(PMs组)、TAMs组、sh-PGC-1α TAMs组PGC-1α蛋白表达水平.(3)验证共培养体系中4T1细胞的侵袭、迁移、愈合能力:利用Transwell小室模型观察对照组(4T1组)、TAMs组、sh-PGC-1α TAMs组4T1细胞的侵袭、迁移数;利用创伤愈合实验观察对照组(4T1组)、TAMs组、sh-PGC-1α TAMs组4T1细胞的愈合情况.(4)验证共培养体系中PMs的PGC-1α对4T1细胞发生细胞上皮-间质转化