目的 制备运动神经元生存(SMN)蛋白多克隆抗体,探讨SMN蛋白在细胞内的定位及在脊髓性肌萎缩症(SMA)患者骨骼肌中的表达情况.方法 构建pET-28a(+)/SMN原核表达质粒,诱导表达SMN-His融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备SMN多克隆抗体.构建pcDNA3.1/myc-HisB-SMN真核表达质粒并转染中国仓鼠卵母(CHO)细胞.收集骨折患者以及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型SMA患者的骨骼肌组织各3份.分别采用免疫印迹及免疫荧光染色技术进行CHO细胞及骨骼肌组织的SMN蛋白表达研究.结果 成功制备了兔抗人全长SMN多克隆抗体,经鉴定其特异性及敏感性均较高.免疫荧光染色显示SMN蛋白在细胞质及细胞核中呈斑片状或颗粒状分布,以核周较为明显.免疫印迹结果显示骨折患者骨骼肌组织SMN与内参照磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)条带密度比值(SMN/GAPDH)平均为0.619,Ⅲ、Ⅱ型SMA患者SMN/GAPDH比值较低,均值分别为0.347和0.340,而Ⅰ型SMA患者骨骼肌中SMN/GAPDH比值显著降低,均值仅为0.079.结论 高质量的兔抗人全长SMN多克隆抗体的制备为SMA的蛋白功能及发病机制研究奠定了基础,SMA患者骨骼肌中SMN蛋白表达量可能与疾病的严重程度相关.
作者：陈万金；吴志英；王柠；苏峻峰；林珉婷；慕容慎行
来源：中华神经科杂志 2007 年 40卷 12期
