目的 构建大鼠c-Jun N末端激酶3(JNK3)在SH-SY5Y细胞的超表达模型.从而研究帕金森病(PD)和阿尔茨海默病(AD)等神经退行性疾病的发生机制与JNK3的相互关系以及建立新的PD和AD治疗药物筛选平台.方法 RT-PCR获得大鼠JNK3(rJNK3)基因片段,连入真核表达载体pcDNA3.1/hisC构建真核表达质粒pcDNA3.1/hisC-rJNk3.脂染法把质粒转染到SHSY5Y细胞内,经过G418筛选出稳定表达rJNK3的单克隆细胞系.Western blot检测其蛋白表达量.通过观察细胞形态、测定细胞生长率、MPP+诱导的细胞凋亡以及细胞免疫荧光定位等实验对细胞系SHSY5Y-rJNK3进行细胞株特性研究.结果 重组质粒pcDNA3.1/hisC-rJNK3转染SHSY5Y细胞构建成稳定表达rJNK3蛋白的细胞系SHSY5Y-rJNK3.SHSY5Y-rJNK3和SHSY5Y细胞形态上差异显著,MTT结果显示生长率也不相同.SHSY5Y-rJNK3比SHSY5Y细胞对MPP+的刺激更敏感.结论 JNK3蛋白在细胞内的过垦表达会导致细胞形态发生一定程度的改变,同时导致细胞对外界因素诱导的凋亡更加敏感,因此在细胞内过表达rJNK3的SHSY5Y-rJNK3更能客观准确的反映JNK3作用下的神经细胞凋亡现象和本质.
作者：李芳；张昀；苑玉和；胡金凤；陈乃宏
来源：中华神经医学杂志 2008 年 7卷 7期
