目的 研究Dravet综合征相关Ⅰ型电压依赖性钠通道(NaV 1.1)截短突变体F1237fsX1269蛋白在HEK293T细胞中总蛋白及膜蛋白的表达水平变化,探讨NaV 1.1截短突变的可能致病机制. 方法 以质粒pCMV-SCN1A-WT为模板,构建带有增强型黄色荧光蛋白(EYFP)融合表达的野生型与截短突变质粒(分别标记为pCMV-EYFP-SCN1A-WT、pCMV-EYFP-3710),并转染至HEK293T细胞,48 h后运用生物素标记方法提取总蛋白与膜蛋白,应用Western blotting检测野生型蛋白与截短突变蛋白的总蛋白及膜蛋白表达水平,应用全细胞膜片钳技术记录野生型蛋白与截短突变蛋白所产生的钠电流. 结果 Western blotting检测结果显示:pCMV-EYFP-3710质粒转染HEK293T细胞后可检测到相应截短突变蛋白,相对分子质量约为191 000,且均可在细胞胞浆及胞膜上表达.截短突变蛋白的总蛋白表达水平与野生型蛋白相比明显减少,膜蛋白表达水平只有野生型蛋白的43％,差异有统计学意义(P＜0.05).电生理检测结果显示:野生型蛋白可检测到正常钠离子电流[电流密度为(-149.0±7.7) pA/pF],而截短突变蛋白未检测到钠离子电流. 结论 Dravet综合征相关NaV1.1截短突变体F1237fsX1269产生的截短突变蛋白的膜蛋白表达水平降低,并丧失钠离子通道功能,其机制可能与野生型蛋白竞争β1、β2亚基

作者：徐海清；蔡秀曲；余璐；汪洁；廖卫平；石奕武；高玫梅；汤斌

来源：中华神经医学杂志 2015 年 14卷 12期