目的 研究血管内皮生长因子165(VEGF 165)基因对真皮替代物体内管化的影响.方法 采用含体积分数10％ FBS的M199培养基(简称完全培养基)培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC).(1)按随机数字表法将HUVEC分为3组,每组6孔:未转染组,不行转染；空载质粒组,转染pIRES2-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒；VEGF质粒组,转染pIRES2-EGFP-血管内皮生长因子(VEGF)质粒. 转染后24 h,倒置相差荧光显微镜下观察各组细胞中绿包荧光蛋白(GFP)表达情况,流式细胞仪检测各组细胞中GFP的表达率；未转染组行相同检测.以新霉素筛选出空载质粒组和VEGF质粒组稳转细胞进行实验.分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法、ELISA法检测3组细胞中VEGF 165 mRNA和蛋白表达以及细胞培养上清液中VEGF 165的蛋白含量. (2)按随机数字表法将48只雄性裸鼠分为4组,毎组12只:生理盐水组,背部两侧(部位下同)埋植经生理盐水培养2 d的真皮替代物；培养基组,埋植经完全培养基培养2 d的真皮替代物；未转染细胞组,埋植经含未转染HUVEC的完全培养基培养2 d的真皮替代物；转染细胞组,埋植经含VEGF质粒稳转HUVEC的完全培养基培养2 d的真皮替代物.埋植术后3、7、14和21 d取出各组真皮替代物,行免疫组织化学染色,观察其上微血管和HUVEC分布,计数术后14 d微血管数量；
作者：孟庆楠；赵德梅；陈建国；谭谦
来源：中华烧伤杂志 2012 年 28卷 5期
