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目的 探讨二氯化钴(CoCl2)化学缺氧对瘢痕Fb整合素连接激酶(ILK)表达的影响,以及其对细胞增殖的影响. 方法 体外培养7例患者增生性瘢痕Fb,取第5~6代细胞进行实验.7例患者的Fb各取6瓶,分别加入含6种终浓度为0、50、100、150、200、250 μmol/L CoCl2的DMEM培养液培养24 h,采用实时荧光定量PCR法检测ILK mRNA表达.选择最适CoCl2浓度(100 μmol/L)进行缺氧刺激,观察ILK蛋白于CoCl2作用0、1、2、4、12、24 h的表达.将细胞分为正常对照组、阴性对照组、ILK小干扰RNA(siRNA)组,分别将con-siRNA及ILK siRNA转染入后2组细胞,对照组仅以培养液培养,24 h后弃培养液,置于含6种浓度CoCl2的培养液中培养24 h.各组各浓度4个复孔.采用3,3′-[1-(苯氨酰基)-3,4-四氮唑]-二(4-甲氧基-6-硝基)苯磺酸钠(XTT)法检测各组细胞增殖水平.对数据进行单因素方差分析以及重复测量方差分析,多重比较采用LSD法. 结果 100 μmol/L CoCl2作用24 h时ILK mRNA表达最高,与其他浓度CoCl2作用的Fb相比差异有统计学意义(F=50.958,P<0.001).100 μmol/L CoCl2作用1h时Fb ILK蛋白表达量(0.243±0.009)较0 h(0.387±0.017)降低,2 h(0.361±0.010)开始增高,4h(0.584±0.028)、12 h(0.730±0.029)、24 h(0.785±0.031)ILK蛋白表达强度逐渐增强.其

作者:李叶扬;李罡;米兰;林伟华;孙敬恩;汪锦伦;梁振文;王晓红

来源:中华烧伤杂志 2013 年 29卷 3期

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作者:
李叶扬;李罡;米兰;林伟华;孙敬恩;汪锦伦;梁振文;王晓红
来源:
中华烧伤杂志 2013 年 29卷 3期
标签:
缺氧 成纤维细胞 整合素连接激酶 增生性瘢痕 Anoxia Fibroblasts Integrin-linked kinase Hypertrophic scar
目的 探讨二氯化钴(CoCl2)化学缺氧对瘢痕Fb整合素连接激酶(ILK)表达的影响,以及其对细胞增殖的影响. 方法 体外培养7例患者增生性瘢痕Fb,取第5~6代细胞进行实验.7例患者的Fb各取6瓶,分别加入含6种终浓度为0、50、100、150、200、250 μmol/L CoCl2的DMEM培养液培养24 h,采用实时荧光定量PCR法检测ILK mRNA表达.选择最适CoCl2浓度(100 μmol/L)进行缺氧刺激,观察ILK蛋白于CoCl2作用0、1、2、4、12、24 h的表达.将细胞分为正常对照组、阴性对照组、ILK小干扰RNA(siRNA)组,分别将con-siRNA及ILK siRNA转染入后2组细胞,对照组仅以培养液培养,24 h后弃培养液,置于含6种浓度CoCl2的培养液中培养24 h.各组各浓度4个复孔.采用3,3′-[1-(苯氨酰基)-3,4-四氮唑]-二(4-甲氧基-6-硝基)苯磺酸钠(XTT)法检测各组细胞增殖水平.对数据进行单因素方差分析以及重复测量方差分析,多重比较采用LSD法. 结果 100 μmol/L CoCl2作用24 h时ILK mRNA表达最高,与其他浓度CoCl2作用的Fb相比差异有统计学意义(F=50.958,P<0.001).100 μmol/L CoCl2作用1h时Fb ILK蛋白表达量(0.243±0.009)较0 h(0.387±0.017)降低,2 h(0.361±0.010)开始增高,4h(0.584±0.028)、12 h(0.730±0.029)、24 h(0.785±0.031)ILK蛋白表达强度逐渐增强.其