目的 与传统细菌培养法相比较,探讨胶体金免疫层析(GICA)法检测烧伤创面铜绿假单胞菌(PA)的可行性. 方法 2012年1-12月,采集齐齐哈尔医学院附属第三医院烧伤科收治的96例烧伤患者创面分泌物,应用传统细菌培养法鉴定为31例阳性(31株PA)、65例阴性.(1)将2株杂交瘤细胞分别接种于5只BALB/c小鼠腹腔制备抗OprH单克隆抗体,斑点印迹法检测抗体特异性,ELISA法检测抗体型别,间接ELISA法检测抗体效价,菲竞争ELISA法检测抗体亲和力.(2)取1株判定为AmpC β内酰胺酶(简称AmpC酶)阳性的PA,提取酶提取物,单独或与弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂免疫10只BALB/c小鼠制备抗AmpC酶多克隆抗体,间接ELISA法测定抗体效价.(3)制作GICA试纸条.用1 mL胶体金(1 mg/mL)分别标记20 μg抗OprH单克隆抗体、抗AmpC酶多克隆抗体,将二者喷涂于玻璃纤维膜上并划于硝酸纤维素膜上,将1.5 mg/mL羊抗鼠IgG划于距OprH检测线1 cm处.取传统细菌培养法鉴定的31株PA及金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、奇异变形杆菌标准菌株各1株,检测试纸条特异性;采用1×105、5×105、1×106、1 ×107、1×108 CFU/mL PA标准菌株检测试纸条敏感性;将试纸条在4、37℃分别存放10、20、30 d后,观察其检测浓度为1×106、1 ×107、1×108 CFU/mL的PA标准菌株
作者：孙济宇；罗晓庆；白光锐；吴艳敏；官杰；王琪；刘丽
来源：中华烧伤杂志 2014 年 30卷 3期
