目的 探讨P311和TGF-β1在小鼠皮肤Fb中的相互作用及其对Fb功能的影响.方法 取P311野生型和P311基因敲除型C57BL/6新生小鼠各5只,分离培养2种小鼠皮肤Fb.采用第2代Fb完成以下实验,每个实验重复3次.(1)取P311野生型小鼠Fb,按随机数字表法(分组方法下同)分为空白对照组和P311过表达组,每组36孔.空白对照组每孔加入10 μL空载体腺病毒,P311过表达组每孔加入等效价P311腺病毒表达载体.培养48 h后,采用实时荧光定量RT-PCR法和蛋白质印迹法分别检测2组Fb的P311 mRNA及TGF-β1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白表达量(检测方法下同).(2)取P311野生型和P311基因敲除型小鼠Fb各4瓶,待细胞生长至80％ ～90％融合时,检测2种Fb的TGF-β1、α-SMA、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白表达量.(3)取P311野生型小鼠Fb用体积分数为1％ FBS的DMEM培养液饥饿处理3h后,分为空白对照组及5、10、15、20、25 ng/mL TGF-β1组,每组2瓶.空白对照组常规培养,后5组Fb分别加入5、10、15、20、25 ng/mL TGF-β1溶液,培养48 h后检测6组Fb的P311 mRNA表达量.另取P311野生型小鼠Fb,分为空白对照组和10 ng/mL TGF-β1组,每组6孔,免疫荧光法检测2组Fb的P311蛋白表达情况.(4)将P311野生型小鼠Fb同前饥饿处理后,分为空白对照组和10 ng/mL T

作者：张路；李海胜；姚智慧；杨思思；贺伟峰；吴军；罗高兴

来源：中华烧伤杂志 2016 年 32卷 4期