目的研究二氢叶酸还原酶(DHFR,D)与谷氨酰胺合成酶(GS,G)单基因和二氢叶酸还原酶与谷氨酰胺合成酶(DHFR+GS,DG)双基因筛选扩增系统对外源基因表达的影响.方法选择N端部分TPO基因(T184)作为靶基因,以DHFR和GS基因作为筛选及扩增基因构建重组质粒pDCT184与pGCT184,将两种质粒分别转染CHO dhfr-细胞形成单基因筛选扩增系统,两种质粒共转染CHO dhfr-细胞形成双基因筛选扩增系统.在双基因筛选扩增系统中设计三种药物加压方式.第一种为DG方式:先用DHFR系统压力(MTX)筛选,再用GS系统压力(MSX)筛选;第二种为GD方式:先用GS系统压力筛选(MSX),再用DHFR系统压力筛选(MTX);第三种为共加压方式:同时利用DHFR与GS系统压力筛选(MTX+MSX).通过比较T184基因拷贝数及表达水平来研究DHFR和GS双基因筛选扩增系统对外源基因表达的影响.结果 T184基因拷贝数及表达水平在DG双基因筛选扩增系统不同药物加压方式中,均比DHFR或GS单基因筛选扩增系统高,但不同药物选择方式没有明显差异.结论采用DHFR+GS双基因筛选扩增系统共加压方式是提高CHO dhfr-细胞表达外源基因的有效途径.
作者：王志云；魏博；田淑芳；张玉倩；王秀平；楚雍烈；阮力
来源：中华实验和临床病毒学杂志 2002 年 16卷 1期
