目的：制备抗人C12orf28多克隆抗体，明确C12orf28编码蛋白在免疫组织中的分布特征。方法选取免疫原性高、特异性强的羧基端257个氨基酸作为目的片段，以人外周血单个核细胞（PBMC）cDNA为模板，采用PCR获得目的基因C12orf28C257；构建其原核表达载体pET32a(+)-C12orf28C257，转化入大肠埃希菌BL21（DE3），异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达重组蛋白；将重组蛋白免疫大耳白大白兔制备兔源性多克隆抗体，采用ELISA和Western blot分析检测多克隆抗体效价和特异性，采用Western blot明确C12orf28的组织分布特征。结果 PCR扩增得到C12orf28C257目的基因片段，诱导表达重组蛋白并制备了其多克隆抗体。ELISA分析结果显示，多克隆抗体效价＞1︰1.28×106，Western blot分析鉴定得出多克隆抗体具有较高的特异性。结论未知功能基因C12orf28在胎儿肠、淋巴、胸腺和心肌等组织中均有不同程度的表达。
作者：任慧；李红敏；乔雍；刘燃；郝晓花；魏红山
来源：中华实验和临床感染病杂志（电子版） 2013 年 6期
