目的探讨肿瘤坏死因子(TNF)-α对人肝癌细胞HepG2肿瘤抑制基因RECK表达的影响,检测核转录因子(NF)-κB在RECK基因表达的调控中的作用.方法将培养的细胞分为3组,A组用4种浓度的TNF-α(1、5、50、100 μg/L)作用人肝癌细胞HepG2细胞株6h,B组用浓度为50μg/L的TNF-α分别作用HepG2细胞1、6、12、24 h,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测RECK mRNA的表达;C组将NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡硌烷(PDTC,10mol/L)与TNF-α(50μg/L)同时作用以及TNF-α(50μg/L)单独作用于HepG2细胞6 h,凝胶滞留电泳实验(EMSA)DNA结合反应检测NF-κB的活性,RT-PCR和Westem blot分别检测RECK基因mRNA和蛋白的表达,明胶酶谱试验检测细胞MMP-9的活性.结果HepG2细胞中RECK基因无表达,TNF-α作用后RECK的表达显著增高,作用呈时间和剂量依赖关系(P＜0.01),TNF-α能激活NF-κB并能显著抑制HepG2细胞MMP-9的活性(P＜0.01),而PDTC能显著的抑制这种作用(P＜0.01).结论TNF-α能上调RECK基因在肝癌细胞系HepG2中的表达同时抑制细胞MMP-9的活性,而NF-κB可能参与了这一过程.
作者：郑启昌；张勇；秦涛；卢昕；熊俊
来源：中华实验外科杂志 2006 年 23卷 6期
