目的 构建环氧合酶-2L启动子(Cox-2L)及2型生长抑素受体(SSTR2)基因重组腺病毒载体,以研究SSTR2重新表达及腺病毒感染对胰腺癌细胞的影响.方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从人正常胰腺组织中调取SSTR2基因,以HL60细胞基因组DNA为模板,以PCR法调取Cox-2L基因,以SSTR2及Cox-2L基因片段为模板,以PCR法扩增Cox-2L-SSTR2融合基因并连入TaKaRa公司pAxcwit腺病毒载体中,以电穿孔法转化E.Coli后挑选阳性克隆进行PCR及酶切鉴定.以pAxcwit-Cox-2L-SSTR2转染HEK293细胞获得重组腺病毒颗粒,进行PCR、酶切鉴定.结果 调取并连接后的基因片段经测序证实为Cox-2L、SSTR2及Cox-2L-SSTR2融合基因,Cox-2L-SSTR2基因片段及PolyA克隆入T载体,经酶切并测序证实PMD18-T-Cox-2L-SSTR2-PolyA构建成功.pAxcwit-Cox-2L-SSTR2-PolyA经酶切及PCR鉴定,Cox-2L-SSTR2-PolyA融合基因正确连入腺病毒载体.结论 成功构建了Cox-2L-SSTR2基因重组腺病毒载体,为进一步研究SSTR2在胰腺癌细胞中的表达及作用奠定了基础.
作者：王东；巩鹏；王忠裕
来源：中华实验外科杂志 2006 年 23卷 11期
