目的 制备超抗原与抗人膀胱癌单克隆抗体Fab偶联蛋白并鉴定其活性.方法 以木瓜蛋白酶、BDI-1抗体比率1:100制备的Fab与SEA以5倍抗体过量用SPDP偶联;经surperdex-200柱纯化;SDS-PAGE确定纯度及相对分子质量;免疫组织化学法鉴定抗体活性;CCK-8、酶联免疫吸附试验(ELISA)法分析偶联蛋白促PBMC增殖、分泌活性.结果 偶联蛋白、Fab、SEA洗脱出峰时间分别为16、27.5、30 min;SDS-PAGE电泳显示在250×103出现连续条带;免疫组织化学显示仅偶联蛋白组膀胱癌细胞膜呈阳性染色;CCK-8、ELISA法显示偶联蛋白促PBMC增殖指数PI介于1.1±0.1-2.3±0.1;PBMC上清白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ浓度分别为(136.1±12.8)、(140.8±21.8)、(207.7±10.5)ng/L,与SEA组差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 成功制备BDI-1Fab-SEA偶联蛋白,偶联蛋白仍保持良好的T细胞刺激活性和抗体活性.
作者：贡震；韩从辉；郝林；李怀富；郑巍；杨建军；汤文浩
来源：中华实验外科杂志 2009 年 26卷 1期
