目的 观察Ki-67启动子内能与细胞核蛋白结合的转录因子Sp1结合位点,探讨肿瘤细胞Ki-67基因高表达机制.方法 提取Hela细胞核蛋白.针对Ki-67启动子内4个潜在Sp1位点区域A1(-198～-172)、A2(-170～-144)、A3(-63～-37)、A4(-14～+12),以及没有Sp1结合位点的阴性对照区域C(-117～-91),设计相应的Sp1一致性寡核苷酸探针和Sp1突变性寡核苷酸探针,凝胶阻滞电泳实验(EMSA)验证Sp1探针与Hela细胞核蛋白的结合活性.结果 EMSA显示A2、A3、A4一致性探针均可以和Hela细胞核蛋白结合,这种结合可以被相应的100倍浓度非标记的一致性探针竞争抑制,不能被100倍浓度的非标记的突变性探针所抑制.出现结合带的反应中加入Sp1抗体后观察到明显的Supershift现象.A1和C相应探针不能和Hela细胞核蛋白发生结合反应.结论 Ki-67启动子-170～-144、-63～-37和-14～+12区域上存在能与肿瘤Hela细胞核蛋白结合的Sp1结合位点.
作者：李中林；钱国伟；徐为；李望；李圆；张宝福；陈菲菲；田卉；章龙珍；郑骏年
来源：中华实验外科杂志 2010 年 27卷 8期
