目的 构建携带P50基因的重组腺病毒载体,观察其感染宫颈癌Hela细胞后对p-AKT(Thr308)的影响.方法 以PcDNA3.1-p50PIK质粒为模板,构建带有p50PIK基因的重组腺病毒质粒Ad-p50PIK-GFP,酶切鉴定后经PacI线性化后转染HEK293包装细胞,观察细胞内绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,并进行3轮扩增,收获带有目的 片段的腺病毒.将重组腺病毒Ad-p50PIK-GFP感染Hela细胞并通过Western blot技术检测其对p-AKT的影响.结果 将Ad-p50PIK-GFP经Xho I和Kpn I双酶切鉴定和琼脂糖电泳,在1400bp附近有目的 条带,送测序结果与GeneBank报道的序列完全一致,表明重组腺病毒Ad-p50PIK-GFP构建成功;然后将其转染HEK293细胞,绿色荧光表明Ad-p50PIK-GFP在HEK293包装细胞中成功表达;用SDS-PAGE电泳方法检测p50对Akt磷酸化的影响,结果表明高表达蛋白p50明显促进AKT的磷酸化(Thr308).结论 成功构建重组腺病毒Ad-p50PIK,p50在宫颈癌Hela细胞株中的过表达可使p-AKT表达升高.
作者：李进；曹小年；陈成；杨锐；胡俊波；王晶
来源：中华实验外科杂志 2011 年 28卷 8期
