目的 采用组织特异性启动子SM22α,构建靶向大鼠磷脂酰肌醇3激酶β亚单位(Pik3cb)的短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,观察其对静脉移植血管血栓形成和新生内膜增生的影响.方法 建立大鼠颈静脉-动脉移植模型,通过Pluronic F-127质粒缓释系统在血管吻合完成后局部喷涂凝胶进行RNA干扰.实验分4组,每组30只SD大鼠,A组:对照组,空白Pluronic F-127凝胶；B组:SM22α组,含特异性SM22α启动子质粒的凝胶；C组:巨细胞病毒(CMV)组,含非特异性CMV启动子质粒的凝胶；D组:Wortmannin阳性对照组.分别于术后1、3、7、14、28 d截取移植血管,苏木素-伊红(HE)染色观察新生内膜厚度;免疫组织化学检测磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR,Ser2448),原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞捌亡.另设一平行实验组(12只SD大鼠),按上述方法分为4组,于术后3d取材,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(FQ-PCR)测定Pik3cb mRNA的相对表达量.结果 大体观察移植血管通畅率B组最高(86.7％),与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；Pik3cb mRNA相对表达量B、C、D组分别下降了73.3％、81.2％、68.4％,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01)；术后1、3、7、14、28 d,B组与A组比较,磷酸化mTOR(Ser2448)阳性面积均显著降低,细胞凋亡阳性面积均显
作者：徐俊文；邓勇志；王倩；陈丽；杨雪峰
来源：中华实验外科杂志 2013 年 30卷 5期
