目的 探讨合成型血管平滑肌细胞(VSMCs)的分离、培养及鉴定方法.方法 采用改良Ⅱ型胶原酶消化法分离、体外培养SD大鼠胸主动脉VSMCs,胰酶消化传代获取第3代细胞,分为空白组与血小板衍生因子-BB(PDGF-BB)处理组.噻唑蓝(MTT)比色法及细胞划痕实验分别检测分析细胞增殖活性与迁移活性;倒置显微镜、结晶紫染色观察形态学改变;免疫细胞化学染色鉴定VSMCs并测定分析收缩型标记蛋白α-平滑肌肌动蛋白(SMA)以及合成型标记蛋白平滑肌胚胎型肌球蛋白重链(SMemb)、原肌球蛋白-4(TPM-4)表达量的变化.结果 空白组VSMCs呈典型“谷峰状”生长,SMA细胞免疫荧光染色及免疫细胞化学染色阳性率≥95％;PDGF-BB处理组VSMCs由收缩型长梭状形态向合成型扁平状形态转化(P＜0.05),VSMCs增殖及迁移活性分别增加11.48％、1.92倍(P＜0.05);收缩型标记蛋白SMA表达下降(P＜0.05),合成型标记蛋白SMemb及TPM-4表达均增加(P＜0.05).结论 PDGF-BB处理后,VSMCs由收缩表型向合成表型转化,增殖迁移活性增加,收缩型标记蛋白表达下降、合成型标记蛋白呈现高表达,表现为高合成型VSMCs的特点.
作者：尚松安；陈相汛；安艳丽；丁洁；滕皋军；马占龙
来源：中华实验外科杂志 2013 年 30卷 12期
