目的 观察同时下调神经上皮细胞转化因子-1(NET-1)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因对非小细胞肺癌细胞生物学行为及血管形成的影响.方法 分别设计与合成靶向NET-1和VEGF的单靶小干扰RNA(NET-1 siRNA和VEGF siRNA)和双靶siRNA(DGT siRNA),转染肺腺癌A549细胞.实时定量荧光聚合酶链反应(RT-qPCR)、Western blot分别检测靶基因NET-1和VEGF mRNA、蛋白的表达水平;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Hoechst染色法检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞的迁移侵袭能力.提取转染48 h后A549细胞的上清液,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测上清液中VEGF的含量,用上清液孵育人血管内皮细胞(HUVECs),观察其管形成能力,检测siRNA干预癌细胞后对血管形成的抑制作用.结果 与未处理组(100.0%)比较,NET-1 mRNA转录和蛋白表达水平在DGT siRNA组[(47.9±3.9)%、(28.3±2.2)%]和NET-1siRNA组[(35.8±5.1)%、(38.2±1.6)%]均有明显下调;VEGF基因mRNA转录和蛋白表达水平在DGTsiRNA组[(53.3±5.6)%、(42.9±5.0)%]及VEGFsiRNA组[(49.4±1.6)%、(18.5±9.9)%]比较未处理组(100.0%)亦有明显下调(P <0.05);MTT实验显示单、双靶siRNA在不同时间点均能明显抑制细胞增殖,且DGTsiRNA组效应明显优于单靶组(P<0.05);Transwell实验中
作者:乔羽;仲崇俊;陈莉;夏春秋;黄海涛
来源:中华实验外科杂志 2014 年 31卷 11期