目的 比较3种大鼠肝细胞原代分离培养方法的差异.方法 采用原位两步胶原酶灌流法(A法)、离体两步灌流法(B法)及剪切消化法(C法)3种方法分离大鼠肝细胞,采用血细胞计数法计数肝细胞产量,采用0.4％锥虫蓝染色观察细胞活力,Percoll分离液密度梯度离心法纯化肝细胞至活力在92％以上,然后接种于杜尔伯科改良伊格尔培养基(DMEM)-F12培养基中培养,糖原染色(PAS)法鉴定肝细胞,倒置相差显微镜观察肝细胞形态,定期收集肝细胞培养液上清检测葡萄糖、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及白蛋白的水平.结果 A、B、C法分离获得的肝细胞总数分别为(2.14±0.66)×108、(2.09±0.58) ×108、(1.16±0.03) ×108个/整肝,C法与A法对比差异有统计学意义(P＜0.01);A、B、C法获得的大鼠肝细胞活力分别为(93.80±4.68)％、(84.40±2.43)％、(38.95±4.89)％,B法与A法对比差异有统计学意义(P＜0.05),C法与A法对比差异有统计学意义(P＜0.01);培养液上清葡萄糖水平在3～11d维持在一个稳定水平;AST、ALT水平在培养3d后下降显著,6～9 d后维持在相对稳定的水平.白蛋白的分泌功能第7天达高峰,11d内维持在较稳定水平.培养液上清第7天上述生化指标,B法和C法与A法对比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 A、B、C3种分离方法均
作者：杨友生；瞿祥春；胡松
来源：中华实验外科杂志 2016 年 33卷 3期
