目的 研究印第安刺猬蛋白(Ihh)信号通路在人终板软骨细胞自然退变进程中的表达变化,揭示其与终板软骨退变之间的内在联系.方法 获取9例因颈椎外伤经皖南医学院弋矶山医院脊柱骨科手术治疗的患者术中废弃椎间盘组织,分离并体外培养终板软骨细胞.根据细胞传代次数分为空白对照组、自然退变组和抑制组.空白对照组为P1代细胞,自然退变组为P3代细胞,抑制组为传代过程中加入Ihh信号通路特异性抑制剂环巴胺(Cyclopamine)的P3代细胞.通过倒置相差显微镜、甲苯胺蓝染色和阿新蓝染色观察3组细胞形态学及表型变化;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测3组细胞中聚集蛋白聚糖(AGN)、Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)、人性别决定区Y框蛋白9(SOX9)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达;Western blot检测3组细胞中Ihh信号通路关键蛋白Ihh、Gli1以及MMP-13蛋白水平.结果 随着体外传代次数的增加,人终板软骨细胞增殖能力逐渐减弱,细胞趋于梭形变,细胞表型逐渐丧失;自然退变组较空白对照组AGN、ColⅡ表达下降(0.36±0.05比1.00±0.03,P＜0.叭;0.28±0.06比1.00±0.01,P＜0.01),MMP-13表达上升(1.66±0.15比1.00±0.02,P＜0.01),抑制组较自然退变对照组AGN,ColⅡ表达上升(0.54±0.05比0.36±0.05,P＜0.01;0.61±0.07比0.28±0.06,P＜0.0
作者：肖良；徐宏光；王凌挺；陈学武；杨晓明；张玙
来源：中华实验外科杂志 2016 年 33卷 8期
