目的 观察RNA干扰BAG-1基因表达对肝癌细胞增殖凋亡及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响.方法 以人正常肝癌细胞L02作为对照细胞,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot分别检测BAG-1在无转移能力的HepG2、Huh7人肝癌细胞株及转染潜能依次增高的MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3人肝癌细胞株中的表达;将阴性小干扰RNA(siRNA)和BAG-1-siRNA转染HCCLM3细胞,不转染的细胞为空白对照组,转染48 h后检测转染效果;分别于转染后的24、48、72 h通过细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞的增殖;流式细胞仪检测转染48 h细胞的凋亡;Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、生存素(Survivin)、c-Myc的蛋白表达.结果 BAG-1在肝癌细胞中的表达均显著高于对照细胞L02(mRNA表达:PHepG2=0.000;PHuh7=0.000;PMHCC97L=0.000;PMHCC97H=0.000;PHCCLM3=0.000;蛋白表达:PHepG2=0.030;PHuh7=0.001;PMHCC97L=0.000;PMHCC97H=0.000;PHCCLM3=0.000);BAG-1-siRNA转染HCCLM3细胞后BAG-1的蛋白表达(0.097 ±0.010)显著低于空白对照组(0.489±0.039)(P=0.000);BAG-1-siRNA转染HCCLM3细胞48 h(0.312±0.024)和72 h(0.398±0.036)后细胞的增殖显著低于空白对照组(0.448 ±0.032)、(0.673±0.051)(P48h=0.004;P72 h=0.002);
作者:高志强;汪俊峰;陈德华;马雪松;唐哲
来源:中华实验外科杂志 2017 年 34卷 11期