目的 建立靶向生长激素促泌素受体1a(GHSR1a)基因短发夹干扰RNA(shRNA)慢病毒表达载体,感染至人直肠癌细胞株SW480,观察沉默GHSR1a基因对体外SW480细胞生长和凋亡的影响.方法 Western blot检测GHSR1a在人直肠癌Caco-2和SW480细胞及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;构建特异性靶向GHSR1a基因的shRNA慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体;通过慢病毒感染建立稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞(KD)、阴性对照细胞(NC)及空白对照细胞(BC),反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测GHSR1a mRNA在细胞中的表达;通过Western blot技术检测细胞中GHSR1a蛋白的表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定感染GHSR1a shRNA后对SW480细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡.结果 在体外实验中,GHSR1a蛋白在Caco-2和SW480细胞中的表达水平分别为89.24±12.95和124.82±17.67,明显高出NCM460细胞中的表达水平(23.51±4.28);通过荧光表达及流式细胞学结果表明成功建立稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞;SW480细胞感染GHSR1a shRNA后,GHSR1a蛋白在BC、NC和KD组中的表达分别为73.27±8.69、69.82±7.14和11.73±1.94,GHSR1a mRNA在BC、NC和KD组中的相对表达量分别为124.31±14.78、136.62±17.20和38.94±4.13,KD组细胞中GHSR1a蛋白及m

作者：黄成钢；蔡学宏；徐佳；张三军

来源：中华实验外科杂志 2018 年 35卷 2期