目的 重组慢病毒介导转化生长因子(TGF)-β3/胰岛素样生长因子-1(HIGF-1)联合基因转染兔骨髓间充质干细胞,诱导其软骨细胞分化,比较与TGF-β3单基因转染诱导其软骨细胞分化的效率.方法 全骨髓贴壁法分离、培养骨髓间充质干细胞,流式细胞术检测细胞表面抗原,培养后通过重组慢病毒分别转染阴性对照(N组)、TGF-β3单基因(T组)、TGF-β3/HIGF-1联合基因(TB组),培养14 d后,荧光显微镜下观察各组细胞形态,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot分别检测性别决定区Y框蛋白9(SOX9)、蛋白多糖、Ⅱ型胶原在基因水平与蛋白水平的表达量.结果 流式细胞术检测造血干细胞标志物(CD34,2.07%)、白细胞表面抗原[人类白细胞抗原DR基因(HLA-DR),1.73%]均为阴性,透明质酸受体(CD44,82.79%)为阳性,荧光显微镜观察诱导后细胞形态多为多角形、方形或者类圆盘状;RT-PCR结果显示:T组SOX9、蛋白多糖、Ⅱ型胶原基因表达量为0.645±0.024、0.587±0.018、0.616±0.019,显著高于C组(0.192 ±0.012、0.241±0.021、0.273 ±0.015),N组(0.211±0.014、0.224±0.016、0.232±0.022) (P =0.000);TB组基因表达量为0.832±0.013、0.746±0.024、0.951 ±0.026,显著高于T组(P=0.000).T组SOX9、蛋白多糖、Ⅱ型胶原蛋白表达量为1.36±0.
作者:黄辉;李海涛;蔺媛媛;李娅娟;杨迭影;夏晨蕾;夏长所
来源:中华实验外科杂志 2018 年 35卷 3期