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目的 研究结直肠癌中肿瘤相关成纤维细胞促进结直肠癌细胞增殖的机制.方法 体外培养原代结直肠癌组织肿瘤相关成纤维细胞(CAF)以及癌旁正常纤维细胞(NF),利用慢病毒高表达人端粒酶反转录酶(hTERT)使其永生化,收集上清处理肿瘤细胞以及将肿瘤相关成纤维细胞或癌旁正常成纤维细胞和肿瘤细胞置入Transwell共培养系统,脂质体介导低氧诱导因子-1(HIF-1α)为靶分子的小干扰RNA(siRNA)转染结肠癌细胞株SW48后,利用细胞核增殖抗原(Ki-67)流式染色、集落形成实验、流式细胞周期检测测定细胞增殖能力的变化,利用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测生长曲线,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中HIF-1α的表达.应用SPSS17.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,用独立样本t检验来比较组间差异.结果 siRNA 1 ~2组HIF-1α表达水平明显低于阴性对照组,CAF上清处理组较空白对照组克隆生成率明显增高(43.6%比12.4%,t=-12.376,P<0.01),流式细胞周期检测显示CAF共培养组、NF共培养组,HIF-1αsi± CAF共培养组G1~ G0期、S期细胞比例分别为(54.6±2.5)%比(65.1±3.0)%比(67.2±1.0)%(F=6.400,P<0.05)、(30.51±2.3)%比(20.3±1.8)%比(21.6±3.8)%(F=4.690,P<0.05),CAF共培养组、NF共培养组、HIF-1α

作者:姚洋;张容圣;李庚;冯永东

来源:中华实验外科杂志 2019 年 36卷 11期

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作者:
姚洋;张容圣;李庚;冯永东
来源:
中华实验外科杂志 2019 年 36卷 11期
标签:
结直肠癌 肿瘤相关成纤维细胞 低氧诱导因子-1 Colorectal cancer Cancer associated fibroblasts Hypoxia inducible factor-1α
目的 研究结直肠癌中肿瘤相关成纤维细胞促进结直肠癌细胞增殖的机制.方法 体外培养原代结直肠癌组织肿瘤相关成纤维细胞(CAF)以及癌旁正常纤维细胞(NF),利用慢病毒高表达人端粒酶反转录酶(hTERT)使其永生化,收集上清处理肿瘤细胞以及将肿瘤相关成纤维细胞或癌旁正常成纤维细胞和肿瘤细胞置入Transwell共培养系统,脂质体介导低氧诱导因子-1(HIF-1α)为靶分子的小干扰RNA(siRNA)转染结肠癌细胞株SW48后,利用细胞核增殖抗原(Ki-67)流式染色、集落形成实验、流式细胞周期检测测定细胞增殖能力的变化,利用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测生长曲线,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中HIF-1α的表达.应用SPSS17.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,用独立样本t检验来比较组间差异.结果 siRNA 1 ~2组HIF-1α表达水平明显低于阴性对照组,CAF上清处理组较空白对照组克隆生成率明显增高(43.6%比12.4%,t=-12.376,P<0.01),流式细胞周期检测显示CAF共培养组、NF共培养组,HIF-1αsi± CAF共培养组G1~ G0期、S期细胞比例分别为(54.6±2.5)%比(65.1±3.0)%比(67.2±1.0)%(F=6.400,P<0.05)、(30.51±2.3)%比(20.3±1.8)%比(21.6±3.8)%(F=4.690,P<0.05),CAF共培养组、NF共培养组、HIF-1α