目的:探讨微小RNA-4318(miR-4318)靶向调控外被体蛋白复合物亚基β’(COPB2)在前列腺癌侵袭转移中的作用机制。方法:通过Target Scan Human 7.0数据库预测COPB2 3’非编码区(3’UTR)可能结合的miRNA,双荧光素酶报告基因验证miR-4318与COPB2的靶向关系。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测转染mimics及inhibitors后的蛋白及RNA表达量,通过Transwell法检测细胞的侵袭和迁移能力。组间比较采用独立样本
t检验。
结果:Target Scan Human 7.0数据库预测COPB2 3’UTR区可能结合的miRNAs,结果显示miR-4318结合可能性最大。通过临床15对前列腺癌与癌旁组织中miRNAs的表达量比对,结果发现上述3种miRNAs中只有miR-4318在大部分癌组织中表达(10.18±9.32)低于癌旁组织(21.46±36.19)。双荧光素酶报告结果表明,对比mimic-NC和WT-COPB2共转染比较双荧光素酶相对活性(2.31±0.02),miR-4318和WT-COPB2共转染明显降低DU145细胞的双荧光素酶相对活性(0.38±0.12),差异有统计学意义(
t=92.870,
P<0.05)。RT-qPCR结果显示,在PC3、DU145细胞中转染miR-4318 mimics后,miR-4318的表达水平(3.94±0.34、2.42±0.33)显著高于mimic-NC组(1.09±0.07、0.97
作者:冯岩岩;潘海燕;万宏源;吴升;孙健;陈雪芬;糜远源;祝黎洁
来源:中华实验外科杂志 2022 年 39卷 5期