目的:探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)源性外泌体中微小RNA(miR)-25参与促进食管癌细胞转移的作用及机制。方法:获取新鲜食管癌及癌旁组织,通过贴壁法分别获得CAFs和成纤维细胞(NFs),蛋白质印迹法(Western blot)和免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)的表达进行鉴定。用超速离心法提取CAFs和NFs的外泌体,用Western blot和透射电镜对外泌体进行鉴定,采用荧光实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测食管癌组织和癌旁组织中miR-25的表达,结果用配对样本
t检验进行统计学分析。同时用RT-qPCR检测CAFs、NFs和相应外泌体,以及外泌体共培养的食管癌TE-1中miR-25的表达,并将外泌体与TE-1共培养后检测TE-1迁移侵袭能力。Western blot及荧光素酶实验明确miR-25的靶基因,结果用非配对样本
t检验进行统计学分析。
结果:RT-qPCR结果提示,与癌旁组织比较,食管癌组织中高表达miR-25(
n=30,
t= 3.46,
P<0.05);miR-25在CAFs中的表达高于NFs(
t=5.37,
P<0.05);免疫荧光结果提示,相较于NFs,CAFs中α-SMA、Vimentin荧光信号增强;Western blot结果提示外泌体中表达CD9和TSG101蛋白,且透射电镜鉴定符合外泌体特征;RT-qPCR结果提示,
作者:桑永华;杨文涛;王一飞;薛祥;徐学君;陈勇兵;张文雅
来源:中华实验外科杂志 2022 年 39卷 8期