目的:探讨人骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体对骨肉瘤细胞MG63增殖与迁移的影响。方法:采用贴壁培养法分离人BMSCs,流式细胞技术对BMSCs鉴定。采用超速离心法分离BMSCs外泌体,透射电镜观察外泌体形态、蛋白质印迹法(Western blot)检测外泌体特异性分子标志物CD81、CD63。将体外培养的MG63细胞分为BMSCs外泌体实验组和对照组。采用细胞计数法、细胞增殖实验(CCK-8)和细胞划痕实验检测细胞的增殖和迁移,采用聚合酶链反应(PCR)及Western blot技术检测外泌体干预后B淋巴细胞瘤-2蛋白(bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax)表达。两组间比较采用
t检验,多组间比较采用单因素方差分析。
结果:透射电镜观察到外泌体超微结构,Western blot检测到外泌体表面标志物CD81、CD63。BMSCs外泌体被骨肉瘤MG63细胞摄取24 h后,实验组与对照组MG63细胞分别为(4.469±0.132)×10
6个和(2.445±0.673)×10
6个,差异有统计学意义(
t=5.110,
P<0.05)。浓度为200、400、600、800 μg/ml BMSCs外泌体组细胞的吸光度(
A)值分别为1.380±0.093、1.770±0.206、1.865±0.090和1.878±0.182,与空白对照组(0.994±0.084)比较,差异均有统计学意义(
F=22.272,
P<0.05)。细胞划痕
作者:齐进;张芮浩
来源:中华实验外科杂志 2022 年 39卷 10期