目的:建立以及验证人肝细胞L-02缺血再灌注损伤(IRI)模型。方法:分别利用液体石蜡、氯化钴(CoCl
2)以及缺氧培养箱构建人肝细胞株L-02 IRI模型,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,利用相关试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,利用异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙锭(Annexin V-FITC/PI)细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹(Western blot)法测定凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)以及B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(bax)表达水平,通过以上方法对3种方式构建肝细胞IRI效果进行验证以及统计分析。两组间的比较采用
t检验,多组间比较采用单因素方差分析。
结果:利用液体石蜡、CoCl
2以及缺氧培养箱构建的肝细胞IRI模型的细胞活力均低于对照组,各组细胞450 nm吸光度分别为(0.698±0.021、0.622±0.029、0.725±0.025比1.086±0.123),差异有统计学意义(
F=30.02,
P<0.01),其中液体石蜡组、缺氧培养箱组的细胞活性要高于CoCl
2组(
t=3.660、4.605,
P均<0.05);各组SOD水平均低于对照组[(117.678±9.797)、(100.095±5.588)、(105.614±4.880) U/mg蛋白比(172.378±6.208) U/mg蛋白,
作者:吴昊;齐炳才;张锦锐;张赛;白易;张雅敏;沈中阳
来源:中华实验外科杂志 2022 年 39卷 12期