目的 观察新型免疫抑制剂FTY720对体外培养的正常大鼠肾小球系膜细胞(GMC)的促凋亡作用及其对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响,以探讨其作用机制.方法 体外培养大鼠GMC,加入20 μmol/L FTY720,分别作用6 h、12 h、24 h、48 h后,以MTT法检测GMC增殖情况;流式细胞术检测GMC凋亡;Hoechst33258和PI染色观察凋亡细胞形态变化;琼脂糖DNA凝胶电泳法观察凋亡细胞核小体DNA的断裂现象.并通过SuperArray实时定量PCR细胞周期基因芯片测定FTY720对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响.结果 加入FYY720培养6 h后,流式细胞术检测发现,GMC出现典型细胞凋亡的亚二倍体峰;12 h后Hoechst33258和PI荧光染色观察发现亮蓝色的凋亡小体,且开始出现典型细胞凋亡形态改变;24 h后DNA琼脂糖凝胶电泳可见凋亡梯度的出现.随FTY720作用时间延长,细胞凋亡明显增加,不同时间组间细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.01).SuperArray实时定量PCR细胞周期基因芯片发现FTY720分别显著上调系膜细胞Dnajc2、LOC688900、RGD1562436_predicted基因表达,分别达41.6、38和16倍.结论 FTY720在体外可呈时间依赖诱导正常大鼠GMC凋亡,其机制与影响细胞周期调节蛋白及凋亡相关基因的表达有关.
作者：陈美；江警予；张瑜；王奕；郝燕；周建华
来源：中华肾脏病杂志 2009 年 25卷 1期
