目的 研究nephrin在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导足细胞凋亡中的作用,以及可能的分子机制.方法 体外培养永生化小鼠足细胞( MPC),以不同浓度AngⅡ处理MPC和10-8 mol/L AngⅡ刺激不同时间,用流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时定量PCR、免疫荧光和Western印迹法检测nephrin的表达和分布;Western印迹法检测Akt磷酸化水平.脂质体法转染pcDNA3.1-mNPHS1质粒,G418筛选稳定转染细胞系.用Akt抑制剂LY294002或与AngⅡ共孵育刺激MPC和pcDNA3.1 -mNPHS1转染细胞,检测Akt磷酸化水平和细胞凋亡率.结果 (1)AngⅡ以剂量和时间依赖方式诱导MPC凋亡.AngⅡ受体拮抗药氯沙坦与AngⅡ共孵育18 h,显著降低AngⅡ单独刺激的足细胞凋亡率(P<0.05).(2)10-8 mol/L AngⅡ刺激12 h后,nephrin mRNA和蛋白较对照组显著降低,24 h nephrin mRNA约为正常对照的50%(P<0.05).正常足细胞nephrin主要分布于核膜周围的胞质和细胞膜,随刺激时间延长,胞膜和胞质nephrin表达逐渐降低.(3)10-8 mol/L AngⅡ刺激15 min后,Akt磷酸化显著降低,约为正常对照细胞的50%(P< 0.01).(4)AngⅡ与LY294002共孵育12 h后,细胞凋亡率显著高于AngⅡ和LY294002单独刺激(均P<0.05).(5)pcDNA3.1-mNPHS1稳定转染显著上调足细胞Akt磷酸化水平(P<0.05),抑制AngⅡ诱导的细胞
作者:梁伟;韦忠平;任志龙;胡凤琪;陈铖;丁国华
来源:中华肾脏病杂志 2011 年 27卷 10期