目的 证实去甲斑蝥素(NCTD)具抗肾间质纤维化的作用,其抗肾间质纤维化的机制与靶向抑制蛋白磷酸酶2Ac(PP2Ac)对Smad3中间连接区(Smad3-L)的去磷酸化修饰有关.方法 常规培养人肾小管上皮细胞(HK-2),转染PP2Ac shRNA质粒后,细胞分为5组:(1)空白组;(2)TGF-β1(5μg/L)组;(3) TGF-β1 +NCTD (2.5 mg/L)组;(4)TGF-β1+PP2Ac shRNA组;(5)TGF-β1+PP2Ac shRNA+NCTD组.采用实时荧光定量PCR和Western印迹检测PP2Ac、纤维连接蛋白(FN)、胶原蛋白Ⅰ (Col-Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(Ecadherin) mRNA及蛋白的表达.然后将HK-2细胞随机分为3组:(1)空白组;(2)TGF-β1组;(3)TGF-β1+NCTD组,采用免疫荧光检测pSmad3-L(Ser204)和pSmad3-L(Ser208)在HK-2细胞的分布,Western印迹检测HK-2细胞核蛋白pSmad3-L(Se204)和pSmad3-L(Ser208)的表达.结果 (1)TGF-β1促进HK-2细胞PP2Ac表达,同时上调FN、Col-Ⅰ和α-SMA的表达,下调E-cadherin 的表达.NCTD和PP2Ac shRNA均抑制PP2Ac的表达,下调FN、Col-Ⅰ和α-SMA表达,上调E-cadherin的表达.但NCTD与小干扰RNA共同作用对PP2Ac表达的抑制,以及对TGF-β1诱导的上述指标的改变程度同单纯PP2Ac小干扰RNA干预组无明显差异.(2)TGF-β1刺激HK-2细胞核内pSmad3-L(Ser204)、pSmad

作者：肖争；尤燕华；李瑛；李华；向玉琼；庾楠楠；李军；段邵斌；刘虹

来源：中华肾脏病杂志 2015 年 31卷 5期