目的 观察7,8-二.羟基黄酮(7,8-DHF)对缺氧诱导的人近端肾小管上皮细胞内质网应激(ERS)损伤的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2),采用缺氧培养箱建立细胞缺氧损伤模型,排除含血清培养基对缺氧的影响后,实验分为5组,分别为缺氧0h、4h、8h、12 h、16h组.实时荧光定量PCR(RT-PCR)法筛选缺氧诱导ERS的最佳缺氧时间.用不同浓度(50、100、150、200、250 μmol/L)7,8-DHF处理HK-2细胞,采用细胞增殖与活性实验筛选7,8-DHF的安全浓度.用7,8-DHF预处理HK-2细胞缺氧模型,按以下处理因素分组:对照组、缺氧+DMSO组、缺氧+7,8-DHF组(包括100 μmol/L组和150 μmol/L组),通过检测细胞增殖与活性筛选最佳给药浓度.后将细胞随机分为缺氧组、缺氧+7,8-DHF组(100 μmol/L),Western印迹法检测细胞蛋白激酶(Akt)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt)、富含半胱氨酸蛋白61 (Cyr61)、ERS相关促凋亡蛋白CCAAT增强子结合蛋白(CHOP)的表达.用重组Cyr61慢病毒载体构建稳定表达Cyr61蛋白的Cyr61-HK-2细胞株进行缺氧实验,按如下处理因素分组:缺氧+空质粒转染组,缺氧+Cyr61过表达组,膜连蛋白V和碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹法检测Cyr61和CHOP蛋白的表达情况.结果

作者：马蕊；岳少姮；赵晴；徐岩

来源：中华肾脏病杂志 2016 年 32卷 11期