目的 研究肾母细胞瘤过度表达蛋白(nephroblastoma over-expressed protein,CCN3)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小球系膜细胞胞外基质(ECM)合成的影响及微小RNA-29(miRNA-29)在其中的作用机制.方法 体外培养人肾小球系膜细胞(HMC),观察外源给予不同浓度(5、50、500 μg/L)重组CCN3蛋白或内源转染pcDNA-3.1(+)-CCN3质粒对TGF-β1诱导的ECM和miRNA-29家族(a、b、c)表达的影响.HMC转染miRNA-29a抑制物和类似物,探讨miRNA-29a在CCN3调节TGF-β1诱导的ECM表达中的作用.实时荧光定量PCR检测各组纤连蛋白(FN)、I型胶原蛋白(COLI)的mRNA及miRNA-29家族(a、b、c)的表达,Western印迹检测各组FN、COLI的蛋白表达,细胞免疫荧光检测各组FN、COLI的表达.结果 (1)与正常对照组比较,TGF-β1干预后HMC的FN、COLI蛋白及mRNA表达均增加,miRNA-2%、b、c的表达均降低(均P<0.05).(2)不同浓度CCN3重组蛋白干扰和转染CCN3质粒后TGF-β1诱导的FN、COLI蛋白及mRNA的表达均低于TGF-β1组(均P<0.05);而50、500 μ,g/L CCN3重组蛋白干预组和转染CCN3质粒组miRNA-29a的表达较TGF-β1组增加(均P< 0.05),其余miRNA-29家族表达与TGF-β1组比较差异无统计学意义(均P>0.05).(3)与TGF-β1+重组CCN3蛋白组比较,TGF-β1+重组CCN3蛋
作者:刘宏;刘海飞;陈珑;闻毅;刘必成
来源:中华肾脏病杂志 2017 年 33卷 7期