目的应用PCR致变及基因克隆技术,获得抗原性保留，但超抗原毒性明显下降的葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体,用作新型淋巴细胞激活分子和超抗原疫苗的研究。方法用PCR和PCR致变技术,从SEB标准株扩增SEB(SEB-N)和SEB突变基因(SEB-M),分别与原核表达质粒pTrc99A重组,转化大肠杆菌JM109,经筛选获得重组质粒pTrcNb和pTrcMb,用双脱氧链终止法作序列分析。表达的SEB-N和SEB-M蛋白,经双向免疫扩散试验作抗原性鉴定后,刺激小鼠脾细胞并由ELISA法检测培养上清中IL-2的水平。结果 SEB-N 150位苏氨酸(密码子ACT)非定向突变为丙氨酸(密码子GCT),SEB-M 23位天冬酰胺(密码子AAT)定向突变为丝氨酸(密码子AGT)。两种突变基因表达的蛋白均与抗SEB形成明显沉淀线,与天然SEB刺激小鼠脾细胞产生IL-2水平相比,SEB-N和SEB-M突变体蛋白分别下降12.5倍和40倍。结论获得了能表达SEB-N和SEB-M突变体蛋白的2株工程菌。表达的突变体蛋白具有良好的免疫反应性,但刺激小鼠脾细胞产生白细胞介素2的超抗原生物学活性明显下降。
作者：俞红；钱利生
来源：中华微生物学和免疫学杂志 2001 年 21卷 2期
