目的建立PCR结合生物素标记的寡核苷酸探针斑点杂交技术，鉴定临床常见的真菌。方法首先用真菌通用引物扩增白念珠菌、热带念珠菌、假热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、解脂念珠菌、克鲁斯念珠菌、季也蒙念珠菌、黄曲霉、烟曲霉的核糖体大亚单位基因的保守区序列，然后用生物素标记的种特异性寡核苷酸探针与扩增产物杂交。并将此方法用于临床标本和临床分离菌株的检测。结果通用引物可以扩增上述11种临床常见真菌的DNA，扩增片段长度在260bp左右。9种特异性探针分别与11种真菌标准菌株的PCR扩增产物杂交，结果表明每种探针都具有高度特异性。斑点杂交法和Southern杂交法检测敏感性相同，为100fg；琼脂糖凝胶电泳法检测敏感性为1pg。通过69例临床标本和31例临床分离菌株的检测，PCR-杂交法的结果和真菌培养法的结果基本一致。结论 PCR结合生物素标记的寡核苷酸探针杂交技术可将9种临床常见真菌鉴定到种，方法快速、敏感、特异。
作者：黄媛；牟兆钦；陈建魁；尹秀云
来源：中华微生物学和免疫学杂志 2001 年 21卷 3期
