目的制备人乳头瘤病毒HPV16L1-E7重组腺病毒，以期获得防治宫颈癌的重组腺病毒减毒活疫苗。方法以HPV16型的野毒株HPV16-114/K为模板，利用PCR克隆技术制备HPV16L1-E7融合基因pUC19L1-E7，含L1的1～301氨基酸（AA）和E7的1～60 AA的编码DNA序列；并转入腺病毒穿梭质粒pCA14L1-E7，与腺病毒质粒pBHG10共转染293细胞，筛选重组腺病毒rAd5HPV16L1-E7。以PCR、ELISA和Western blot方法鉴定重组病毒及其表达的L1-E7蛋白，密度梯度超速离心纯化HPV16嵌合L1-E7 VLP，电镜观察VLP的形态结构。结果 PCR-DNA序列分析表明成功构建了HPV16L1-E7重组质粒pUC19L1-E7；并获得HPV16重组腺病毒rAd5HPV16L1-E7，在293细胞中可高效表达L1-E7蛋白，并形成嵌合病毒样颗粒（cVLP）。结论构建的重组腺病毒rAd5HPV16L1-E7可有效表达HPV16L1-E7 cVLP，可进一步用于动物实验，研究其在防治宫颈癌中的作用。
作者：卞继峰；于修平；赵蔚明；杨海宁；王芸；胡海燕；周亚滨；贾继辉；栾怡；齐眉；耿昭
来源：中华微生物学和免疫学杂志 2001 年 21卷 4期
