目的 制备含大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因的逆转录病毒,建立荧光定量PCR测定滴度的方法.方法 扩增BDNF基因,构建重组质粒pLXSN-BDNF,将其转染包装细胞,经G418筛选、病毒浓缩后用荧光定量PCR法和克隆形成法测定滴度.结果 经PCR、酶切和测序鉴定,BDNF基因成功插入逆转录病毒载体中,筛选得到稳定的分泌重组病毒细胞系.重组病毒100倍浓缩后经荧光定量PCR法和克隆形成法测定的滴度分别为6.92×106 拷贝/ml和3.2×105 CFU/ml,两种方法测得的结果差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功扩增BDNF基因,制备了重组病毒pLXSN-BDNF,建立了荧光定量PCR检测滴度的方法,为基因治疗青光眼性视神经损伤的实验研究提供重要参考指标.
作者：周欣荣；原慧萍；李鸿翼；邵正波；王雅
来源：中华微生物学和免疫学杂志 2007 年 27卷 8期
