目的 用分子克隆方法构建靶基因为CD4的microRNA的GFP报告载体,并观察其对MT4细胞CD4分子表达的影响.方法 在microRNA在线预测软件中寻找靶基因为CD4的microRNA.设计hsa-mir-181a基因引物,PCR后将产物与T载体连接,双酶切后与pEGFP-N1载体连接.用菌液PCR及测序鉴定正确连接入pEGFP-N1载体.测序正确后电转染MT4细胞系.用荧光定量PCR检测microRNA表达,流式分析检测CD4分子表达.结果 hsa-mir-181a为靶基因为CD4的microRNA.所构建载体测序结果证明连接产物正确.转染细胞后建靶基因为CD4的microRNA稳定表达,并能够使MT4细胞CD4表达下调.结论 表达靶基因为CD4的microRNA的GFP报告基因表达载体构建成功,并且能够抑制CD4分子的表达.本研究为microRNA成为潜在的抗HIV基因治疗工具提供了体外实验的依据.
作者：王宇歌；马凯；雷容悦；朱卫军
来源：中华微生物学和免疫学杂志 2011 年 31卷 11期
