目的 检测单种及2种联合靶向EV71病毒衣壳蛋白VP1、VP2、VP3、VP4基因(VP1～ VP4)的shRNA干扰病毒复制的效果.方法 靶向EV71病毒的VP1～VP4基因序列设计及合成shRNA,并分别将其克隆到慢病毒质粒表达载体pLOV.CMV.EGFP中.重组表达质粒同psPAX2和pMD2.G共转染293T细胞,3d后收集上清中的重组病毒颗粒.用荧光定量RT-PCR法(real-timeqRT-PCR)和Western blot检测单种及2种联合shRNA干扰EV71 mRNA的表达水平及病毒蛋白的表达水平.结果 靶向EV71 VP1～VP4基因的shRNA对本研究的毒株(含死亡病例、重症病例、普通病例,FY0805)复制干扰差异无统计学意义(P＞0.05),对EV71病毒的抑制率分别约为:sh-VP1-1(51.6％),sh-VP1-2 (85.1％),sh-VP1-3(76.4％),sh-VP2-1(57.5％),sh-VP2-2(81.4％),sh-VP2-3(79.5％),sh-VP3 (68.9％),sh-VP4 (56.7％),且有剂量依赖性.干扰病毒效率最高的为sh-VP1-2联合sh-VP2-2,抑制率可达96.6％,联合组均比单种加倍剂量的抑制率高.结论 本研究设计的单独及联合靶向EV71病毒衣壳蛋白每个基因区均筛选到抑制率均大于50％的shRNA,且联合shRNA可以增强其干扰复制的能力.
作者：阎岩；李世军；郭军；周敬祝；唐光鹏；王定明
来源：中华微生物学和免疫学杂志 2014 年 34卷 2期
