目的：本研究选取结核杆菌优秀抗原Rv3478，构建重组疫苗rBCG：Rv3478并对其进行免疫原性评价。方法 PCR扩增基因Rv3478，构建重组质粒Rv3478-pMV261之后电转进入BCG感受态细胞中，另外将扩增的基因片段导入pET-28a中，构建表达载体Rv3478-pET-28a（ BL21）表达蛋白Rv3478，蛋白免疫小鼠获取多克隆抗体，蛋白印迹方法筛选得到表达Rv3478的重组卡介苗；用构建好的重组卡介苗刺激巨噬细胞，收集细胞培养上清 ELISA 检测细胞因子的分泌；重组疫苗rBCG：Rv3478（R3）免疫小鼠，PBS、BCG、BCG：pMV261（R0）作对照组。分别在免疫4周和12周后处死小鼠，用ELISPOT、ELISA、流式细胞术等方法检测疫苗细胞免疫和体液免疫水平。结果成功表达蛋白Rv3478，免疫小鼠后获得多克隆抗体；成功构建重组疫苗R3；免疫小鼠后，能够引发强烈的细胞免疫应答（强烈的IFN-γ反应，高水平的TNF-α的分泌），促进外周血CD4＋／CD8＋T细胞比例增加， CD44＋CD62L＋T细胞百分比增加。结论构建的重组疫苗R3能够引发强烈的免疫应答，显示出良好的免疫原性，具有良好的抗结核潜力，值得进一步研究。
作者：孔聪；朱琳；粟海波；黄琪；李光华；宋娜；徐颖；王洪海
来源：中华微生物学和免疫学杂志 2015 年 5期
