目的:构建小鼠FcγreceptorⅡ-b ( FcγRⅡb)胞外区蛋白原核表达载体pET-FcγRⅡb,诱导表达并纯化,观察其在系统性红斑狼疮( SLE)疾病中的预防与治疗作用。方法 PCR扩增获得小鼠FcγRⅡb基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32 a (+),构建原核表达重组质粒小鼠pET-FcγRⅡb,经PCR、限制性内切酶鉴定及测序分析正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG进行诱导蛋白表达,确定最佳诱导条件,经Western blot鉴定正确后,纯化目的蛋白。 ELISA法检测纯化蛋白与小鼠血清中免疫复合物的结合能力。将MRL/lpr SLE小鼠预防组(周龄12周左右)和治疗组(周龄19周左右)各40只随机分成蛋白液60μl组(4.8μg)、120μl组(9.6μg)、180μl (14.4μg)组以及对照PBS组4组,每组10只,通过尾静脉注射将蛋白液注射进入MRL/lpr SLE小鼠体内,连续注射4周,每周1次。注射完成后,观察1周并收集血清,用ELISA法对预防组与治疗组SLE小鼠的可溶性FcγRⅡb的含量以及小鼠抗双链DNA抗体含量进行检测。结果扩增出了小鼠FcγRⅡb 基因,成功构建原核表达重组质粒小鼠pET-FcγRⅡb,IPTG 诱导表达并纯化出重组蛋白。重组蛋白与小鼠血清具有结合力;预防组和治疗组蛋白组(含60μl、120μl和180μl组)分别与
作者:雷泽华;曹秀琴;杨志伟
来源:中华微生物学和免疫学杂志 2015 年 11期