目的：原核表达并纯化单纯疱疹病毒1型(HSV-1)UL7蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,初步分析UL7蛋白在HSV-1增殖过程中的表达特点。方法 PCR方法扩增UL7基因,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-UL7,转化到E. coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,获得并纯化GST-UL7重组蛋白,将其作为抗原免疫ICR小鼠制备抗UL7多克隆抗体。间接法ELISA检测抗体效价,Western blot检测抗体的特异性,使用该多克隆抗体对HSV-1病毒感染Vero细胞后不同时间点的UL7蛋白表达量进行检测。结果 GST-UL7重组蛋白在E. coli BL21( DE3)中高效表达,间接法ELISA检测抗UL7抗体效价可达1∶105以上。 Western blot试验证明抗UL7多克隆抗体可以特异性识别UL7蛋白。在HSV-1病毒感染Vero细胞后的不同时间点均检测到了UL7蛋白的表达。结论成功获得GST-UL7融合蛋白,且制备了抗UL7蛋白的多克隆抗体,利用该抗体初步确定了UL7蛋白在HSV-1增殖过程中的不同时间点均有表达。
作者：周洁楠；徐兴丽；高有；张莹；王晶晶；刘龙丁；李琦涵
来源：中华微生物学和免疫学杂志 2016 年 36卷 4期
