目的 了解并确定问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株LA2582 和LA2901 基因产物金属内肽酶活性及其致病相关性.方法 采用生物信息学软件分析LA2582 和LA2901 基因结构与功能.构建LA2582 和LA2901 基因胞外区原核表达系统,Ni-NTA 亲和层析法提纯目的重组表达产物rLA2582 和rLA2901.采用分光光度法检测rLA2582 和rLA2901 水解偶氮酪蛋白底物的活性.采用荧光分光光度法检测rLA2582 和rLA2901 水解Dabsyl-Leu-Gly-Gly-Gly-Ala-Edans 荧光标记五肽底物的活性并测定其Km 和Kcat 值.采用SDS-PAGE 和分光光度法分别检测rLA2582 和rLA2901 水解细胞外基质(ECM)分子Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、纤维连接蛋白(FN)和刚果红标记弹性蛋白(ELN)的活性.采用实时荧光定量RT-PCR 和Western blot 法分别检测问号钩端螺旋体赖株感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后LA2582 和LA2901 基因mRNA 和蛋白质表达水平.结果 LA2582 和LA2901 基因产物均为含信号肽和HXH 基质金属蛋白酶基序的锌离子依赖M23 家族Gly-Gly 金属内肽酶.rLA2582 和rLA2901 不能水解偶氮酪蛋白,但能水解荧光五肽底物,其Km 和Kcat 值分别为126. 54μmol/ L 和4. 67/ s 、190. 25 μmol/ L 和4. 86/ s .rLA2582 和rLA2901 具有水解COL1、FN 和ELN 的活性.问号钩体赖株感染HUVEC 后

作者：张颖颖；葛玉梅；方佳琪；林旭瑷；胡玮琳；严杰

来源：中华微生物学和免疫学杂志 2017 年 37卷 10期