目的观察腺病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术对人食管鳞癌细胞(Eca-109)环氧合酶(COX)-2基因表达的抑制效果及其对Eca-109细胞生长的影响.方法采用含RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的质粒pSUPER构建针对人COX-2 mRNA的重组质粒psiRNA/COX-2.Not Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切psiRNA/COX-2得到siRNA/COX-2表达片段,定向克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack的相同位点得到pAdTrack/siRNA/COX-2,后者与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组得到腺病毒Ad/siRNA/COX-2,经293细胞包装、扩增后转染Eca-109细胞.ELISA法测定培养液上清的前列腺素(PG)E2浓度,PCR法检测细胞COX-2 mRNA水平,流式细胞仪检测细胞凋亡与周期分布,绘制细胞生长曲线.结果重组腺病毒Ad/siRNA/COX-2构建成功,转染Eca-109细胞后,细胞COX-2 mRNA水平下降71.7
作者：赵晖；顾晓萌
来源：中华消化杂志 2005 年 25卷 12期
