目的 通过质粒电穿孔法、腺病毒转染法(rAd)和9型腺相关病毒转染法(rAVV9)转染Gαi2羧基末端肽(Gαi2lp)基因至乳鼠心肌细胞,比较不同方法的转染效率、心肌毒性以及对胆碱类药物迷走神经效应的拮抗作用,探寻Gi3ctp基因功能表达的最佳转导途径.方法 构建重组质粒pDC316-Gαi2ctp-mCMV-EGFP(质粒电穿孔组)、重组腺病毒rAd-Gαi2ctp-mCMV-EGFP(rAd组)和重组9型腺相关病毒rAAV9-Gαi2ctp-IRES-EGFP(rAAV9组)以及未携带Gαi2ctp基因的空白对照组(n=10).3种方法转染携带免疫荧光蛋白(EGFP)的Gαi2tp目的基因至乳鼠心肌细胞,探寻最佳电转导参数和病毒最佳感染复数(MOI);比较最佳参数下不同方法转染情况和最大效率;AlamarBlue法测定各时间点还原比率评估心肌毒性;Western-blot法检测Cαi2ctp蛋白表达情况.最后以最适浓度的卡巴胆碱干预各组细胞,通过计数细胞整体搏动频率比较3种方法下Cαi2ctp基因的抗迷走神经效应差异.结果 3种方法最佳参数设置下Gαi2ctp-EGFP蛋白均成功表达且差异无统计学意义,转染效率分别于2、1.5、4 d达最高(54.2％±4.8％、100％和59.2％±4.4％),于第11 d转染效率分别为(30.1％±6.6％、12.0％±-3.4％和36.0％±6.1％);rAAV9组在全观察期l1d内细胞活性接近空白对照组(P＞0.05),质粒电穿

作者：孙庆权；芦颜美；王红丽；周祁娜；周贤惠；汤宝鹏

来源：中华心律失常学杂志 2016 年 20卷 6期