目的 利用构建的血管紧张素转化酶(ACE)2慢病毒表达载体转染平滑肌细胞,探讨ACE2对血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)表达的影响.方法 培养平滑肌细胞,并进行分组及干预:(1)空白对照组:仅加入无血清培养基.(2)慢病毒重组绿色荧光蛋白表达空载体( Lentiviral-GFP,GFP)组:加入感染复数(MOI)为10的Lentiviral-GFP空载体.(3)血管紧张素(Ang)Ⅱ组:加入终浓度为10-7 mol/L的AngⅡ.(4) AngⅡ+慢病毒重组ACE2表达载体(Lentiviral-ACE2,ACE2)组:同时加入浓度为10-7 mol/L的AngⅡ和MOI为10的Lentiviral-ACE2.(5) AngⅡ+厄贝沙坦组:同时加入终浓度为10-7 mol/L的AngⅡ和厄贝沙坦.(6) AngⅡ+ACE2+厄贝沙坦组:同时加入终浓度为10-7 mol/L的AngⅡ和厄贝沙坦以及MOI为10的Lentiviral-ACE2.(7)ACE2组:仅加入MOI为10的Lentiviral-ACE2.将上述干预细胞提取RNA后运用实时PCR检测细胞ATIR mRNA的表达,Western blot技术分别检测细胞ATIR蛋白表达,以及下游信号通路信号转导子和转录激活子3(STAT3)蛋白磷酸化水平.运用CCK-8试剂盒检测上述干预组的细胞增殖水平.结果 (1)AngⅡ+ACE2组和AngⅡ+ACE2+厄贝沙坦组的ATIR mRNA表达均低于AngⅡ组(分别为0.39±0.02和0.24±0.01比1.80±0.08,P分别<0.05和0.01).(2) AngⅡ+ACE2组和AngⅡ+ACE2+厄
作者:龚晶婧;卢卓强;曹金龙;许昌声;王华军;晋学庆
来源:中华心血管病杂志 2012 年 40卷 7期