目的 筛选大鼠缺血心肌微血管内皮细胞(myocardial microvascular endothelial cells,CMEC)血管新生过程中的核心微小RNA(microRNA,miRNA),并探讨其调控机制.方法 健康雄性SD大鼠,6周龄,SPF级.结扎法建立大鼠心肌缺血模型,植块法培养CMEC.免疫细胞化学法鉴定CMEC.大鼠缺血CMEC作为缺血组,正常大鼠CMEC作为正常组,观察缺血CMEC血管新生的生物学特征,确定其血管新生过程中迁移、增殖和成管的窗口期.miRNA芯片检测miRNA的动态表达变化,筛选差异表达显著的miRNA并应用实时聚合酶链反应验证,拟定出缺血CMEC血管新生过程中核心miRNA.生物信息学方法预测核心miRNA靶基因,并用实时聚合酶链反应验证.同时,蛋白印迹法检测靶基因及血管新生相关基因p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氨酸-苏氨酸激酶(Akt)、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达水平.结果 培养的CMEC具备典型微血管内皮细胞特征,第Ⅷ因子、血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)相关抗原免疫染色鉴定均为阳性.正常组和缺血组迁移窗口期均为第1天、成管窗口期均为第2天,而他们的增殖窗口期分别为第3天和第6天.根据表达量差异的显著性以及与血管生成的关系,最终确定miRNA-223-3p为缺血CMEC血管新生的核心miRNA,实时聚合酶链反应验证miRNA-
作者：戴国华；宋宪波；马培泽；刘宁；姚静
来源：中华心血管病杂志 2014 年 42卷 12期
