目的 观察Toll样受体4(TLR4)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞发生氧化应激反应中的作用,并探讨血管紧张素(Ang)-(1-7)对上述反应的作用及其作用机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,并将细胞分为6组,分别为对照组(不干预)、ox-LDL组(以ox-LDL 75 mg/L干预)、ox-LDL+ Ang-(1-7)组[Ang-(1-7)1μmol/L预处理30 min后,以ox-LDL75 mg/L干预]、ox-LDL+ Ang-(1-7)+ A-779组[A-779(Mas受体阻断剂)1μmol/L预处理30 min,然后以Ang-(1-7)1 μmol/L预处理30 min,再以ox-LDL 75 mg/L干预]、ox-LDL+A-779组(A-779 1 μmol/L预处理30 min后,以ox-LDL 75 mg/L干预)、ox-LDL+ HTA125组[HTA125(TLR4特异性阻断抗体)10 μg/L预处理30 min后,以ox-LDL 75 mg/L干预].干预24 h后,分别以膜联蛋白V(Annexin V)-FITC/碘化丙啶(PI)双标记流式细胞术和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测细胞凋亡,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)标记法检测活性氧自由基(R OS)水平,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR4和NADPH氧化酶4 (NOX4)的mRNA表达水平,Western blot检测TLR4和NOX4的蛋白表达水平.结果 (1)AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术显示,ox-LDL组的细胞凋亡比例高于对照组[(21
作者:闫文凤;薛晶晶;杨慧宇;梁斌;杨志明
来源:中华心血管病杂志 2017 年 45卷 3期